ສະພາບແວດລ້ອມວັດທະນະທໍາຂອງເຊນມີຜົນກະທົບຕໍ່ການຜະລິດເຊນ

ຫນຶ່ງໃນຂໍ້ໄດ້ປຽບຕົ້ນຕໍຂອງວັດທະນະທໍາເຊນແມ່ນຄວາມສາມາດໃນການຈັດການເຄມີທາງດ້ານຮ່າງກາຍຂອງການສືບພັນຂອງເຊນ (ເຊັ່ນ: ອຸນຫະພູມ, pH, ຄວາມກົດດັນ osmotic, ຄວາມກົດດັນ O2 ແລະ CO2) ແລະສະພາບແວດລ້ອມທາງກາຍະພາບ (ເຊັ່ນຮໍໂມນແລະຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງສານອາຫານ).ນອກເຫນືອໄປຈາກອຸນຫະພູມ, ສະພາບແວດລ້ອມວັດທະນະທໍາແມ່ນຄວບຄຸມໂດຍຂະຫນາດກາງການຂະຫຍາຍຕົວ.

ເຖິງແມ່ນວ່າສະພາບແວດລ້ອມທາງກາຍະພາບຂອງວັດທະນະ ທຳ ບໍ່ມີຄວາມຊັດເຈນເທົ່າກັບສະພາບແວດລ້ອມທາງກາຍະພາບແລະທາງເຄມີ, ຄວາມເຂົ້າໃຈດີກ່ຽວກັບສ່ວນປະກອບຂອງເຊລອມ, ການກໍານົດປັດໃຈການຂະຫຍາຍຕົວທີ່ຈໍາເປັນສໍາລັບການແຜ່ຂະຫຍາຍ, ແລະຄວາມເຂົ້າໃຈດີຂຶ້ນກ່ຽວກັບສະພາບແວດລ້ອມຈຸນລະພາກຂອງຈຸລັງໃນວັດທະນະທໍາ.(ເຊັ່ນປະຕິສໍາພັນຂອງເຊນ, ການແຜ່ກະຈາຍຂອງອາຍແກັສ, ປະຕິສໍາພັນກັບມາຕຣິກເບື້ອງ) ໃນປັດຈຸບັນອະນຸຍາດໃຫ້ສາຍເຊນບາງທີ່ຈະວັດທະນະທໍາໃນສື່ທີ່ບໍ່ມີ serum.

1.ສະພາບແວດລ້ອມວັດທະນະທໍາຜົນກະທົບຕໍ່ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງເຊນ
ກະ​ລຸ​ນາ​ສັງ​ເກດ​ວ່າ​ເງື່ອນ​ໄຂ​ວັດ​ທະ​ນະ​ທໍາ​ຂອງ​ເຊ​ລ​ແມ່ນ​ແຕກ​ຕ່າງ​ກັນ​ສໍາ​ລັບ​ແຕ່​ລະ​ປະ​ເພດ​ຂອງ​ເຊ​ລ​.
ຜົນສະທ້ອນຂອງ deviating ຈາກເງື່ອນໄຂວັດທະນະທໍາທີ່ຈໍາເປັນສໍາລັບປະເພດຂອງເຊນໂດຍສະເພາະຕັ້ງແຕ່ການສະແດງອອກຂອງ phenotypes ຜິດປົກກະຕິເຖິງຄວາມລົ້ມເຫຼວຂອງວັດທະນະທໍາຈຸລັງ.ດັ່ງນັ້ນ, ພວກເຮົາແນະນໍາໃຫ້ທ່ານຄຸ້ນເຄີຍກັບເສັ້ນຈຸລັງທີ່ທ່ານສົນໃຈແລະປະຕິບັດຕາມຄໍາແນະນໍາທີ່ສະຫນອງໃຫ້ກັບແຕ່ລະຜະລິດຕະພັນທີ່ທ່ານໃຊ້ໃນການທົດລອງຂອງທ່ານ.

2. ຂໍ້ຄວນລະວັງໃນການສ້າງສະພາບແວດລ້ອມການຈະເລີນເຕີບໂຕຂອງເຊນທີ່ເໝາະສົມສຳລັບເຊລຂອງທ່ານ:
ສື່​ວັດ​ທະ​ນະ​ທໍາ​ແລະ serum (ເບິ່ງ​ຂ້າງ​ລຸ່ມ​ນີ້​ສໍາ​ລັບ​ຂໍ້​ມູນ​ເພີ່ມ​ເຕີມ​)
ລະດັບ pH ແລະ CO2 (ເບິ່ງຂ້າງລຸ່ມນີ້ສໍາລັບຂໍ້ມູນເພີ່ມເຕີມ)
ການປູກຢາງພາລາ (ເບິ່ງຂ້າງລຸ່ມນີ້ສໍາລັບຂໍ້ມູນເພີ່ມເຕີມ)
ອຸນ​ຫະ​ພູມ (ເບິ່ງ​ຂ້າງ​ລຸ່ມ​ນີ້​ສໍາ​ລັບ​ຂໍ້​ມູນ​ເພີ່ມ​ເຕີມ​)

2.1 ສື່ວັດທະນະທໍາ ແລະເຊລັມ
ສື່ວັດທະນະທໍາແມ່ນສ່ວນຫນຶ່ງທີ່ສໍາຄັນທີ່ສຸດຂອງສະພາບແວດລ້ອມວັດທະນະທໍາ, ເນື່ອງຈາກວ່າມັນສະຫນອງສານອາຫານ, ປັດໃຈການຂະຫຍາຍຕົວແລະຮໍໂມນທີ່ຈໍາເປັນສໍາລັບການຂະຫຍາຍຕົວຂອງເຊນ, ແລະຄວບຄຸມ pH ແລະຄວາມກົດດັນ osmotic ຂອງວັດທະນະທໍາ.

ເຖິງແມ່ນວ່າການທົດລອງວັດທະນະທໍາຈຸລັງໃນເບື້ອງຕົ້ນໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍໃຊ້ສື່ທໍາມະຊາດທີ່ໄດ້ຮັບຈາກສານສະກັດຈາກເນື້ອເຍື່ອແລະນ້ໍາໃນຮ່າງກາຍ, ຄວາມຕ້ອງການສໍາລັບການມາດຕະຖານ, ຄຸນນະພາບຂອງສື່ແລະຄວາມຕ້ອງການທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນເຮັດໃຫ້ການພັດທະນາສື່ທີ່ແນ່ນອນ.ສາມປະເພດພື້ນຖານຂອງສື່ແມ່ນສື່ພື້ນຖານ, ສື່ກາງທີ່ຫຼຸດລົງແລະສື່ທີ່ບໍ່ມີ serum, ແລະພວກມັນມີຄວາມຕ້ອງການທີ່ແຕກຕ່າງກັນສໍາລັບການເສີມ serum.

2.1.1 ສື່ກາງ
Gibco cell culture medium
ເສັ້ນຈຸລັງສ່ວນໃຫຍ່ຈະເລີນເຕີບໂຕໄດ້ດີໃນສື່ພື້ນຖານທີ່ປະກອບດ້ວຍອາຊິດ amino, ວິຕາມິນ, ເກືອອະນົງຄະທາດ, ແລະແຫຼ່ງກາກບອນ (ເຊັ່ນ: ນໍ້າຕານ), ແຕ່ການສ້າງສື່ພື້ນຖານເຫຼົ່ານີ້ຕ້ອງໄດ້ຮັບການເສີມດ້ວຍເຊລັມ.

2.1.2 ຫຼຸດ serum medium
ຂວດທີ່ມີ Gibco Low Serum Medium
ຍຸດທະສາດອື່ນເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຜົນກະທົບທາງລົບຂອງເຊລັມໃນການທົດລອງວັດທະນະທໍາເຊລແມ່ນການນໍາໃຊ້ສື່ທີ່ຫຼຸດລົງ serum.ຂະຫນາດກາງ serum ຫຼຸດລົງເປັນສູດຂະຫນາດກາງພື້ນຖານທີ່ອຸດົມສົມບູນຂອງສານອາຫານແລະປັດໃຈທີ່ມາຈາກສັດ, ເຊິ່ງສາມາດຫຼຸດຜ່ອນປະລິມານຂອງ serum ທີ່ຕ້ອງການ.

2.1.3 ຂະຫນາດກາງທີ່ບໍ່ມີ Serum
ຂວດທີ່ມີ Gibco serum ບໍ່ມີຂະຫນາດກາງ
ຂະຫນາດກາງທີ່ບໍ່ມີເຊລັມ (SFM) ຫລີກລ້ຽງການໃຊ້ເຊລັມສັດໂດຍການປ່ຽນເຊລັມດ້ວຍໂພຊະນາການທີ່ເຫມາະສົມແລະສູດຮໍໂມນ.ວັດທະນະທໍາຕົ້ນຕໍຈໍານວນຫຼາຍແລະສາຍຈຸລັງມີສູດຂະຫນາດກາງທີ່ບໍ່ມີ serum, ລວມທັງສາຍການຜະລິດທາດໂປຼຕີນຈາກຮັງໄຂ່ຂອງ Hamster ຂອງຈີນ (CHO), ສາຍຈຸລັງ hybridoma ຕ່າງໆ, ສາຍແມງໄມ້ Sf9 ແລະ Sf21 (Spodoptera frugiperda), ເຊັ່ນດຽວກັນກັບເຈົ້າພາບສໍາລັບການຜະລິດເຊື້ອໄວຣັສ. (ຕົວຢ່າງ: 293, VERO, MDCK, MDBK), ແລະອື່ນໆ ຫນຶ່ງໃນຂໍ້ໄດ້ປຽບຕົ້ນຕໍຂອງການນໍາໃຊ້ຂະຫນາດກາງທີ່ບໍ່ມີ serum ແມ່ນຄວາມສາມາດໃນການເລືອກຂະຫນາດກາງສໍາລັບປະເພດເຊນສະເພາະໂດຍການເລືອກການປະສົມປະສານທີ່ເຫມາະສົມຂອງປັດໃຈການຂະຫຍາຍຕົວ.ຕາຕະລາງຕໍ່ໄປນີ້ບອກເຖິງຂໍ້ດີ ແລະຂໍ້ເສຍຂອງສື່ທີ່ບໍ່ມີເຊລັມ.

ຂໍ້ໄດ້ປຽບ
ເພີ່ມຄວາມຊັດເຈນ
ການປະຕິບັດທີ່ສອດຄ່ອງຫຼາຍຂຶ້ນ
ການຊໍາລະລ້າງແລະການປຸງແຕ່ງທາງລຸ່ມງ່າຍຂຶ້ນ
ປະເມີນການເຮັດວຽກຂອງເຊນຢ່າງຖືກຕ້ອງ
ເພີ່ມຜົນຜະລິດ
ການຄວບຄຸມທີ່ດີກວ່າຂອງຕິກິຣິຍາ physiological
ປັບປຸງການກວດຫາສື່ມືຖື
ຂໍ້ເສຍ
ປະເພດເຊລຕ້ອງການສູດຂະຫນາດກາງສະເພາະ
ຕ້ອງການຄວາມບໍລິສຸດ reagent ສູງກວ່າ
ການເຕີບໂຕຊ້າລົງ

2.2.1 ລະດັບ pH
ເສັ້ນຈຸລັງ mammalian ປົກກະຕິສ່ວນໃຫຍ່ຈະເລີນເຕີບໂຕໄດ້ດີຢູ່ທີ່ pH 7.4, ແລະຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງສາຍຈຸລັງທີ່ແຕກຕ່າງກັນແມ່ນນ້ອຍ.ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ບາງເສັ້ນຈຸລັງທີ່ປ່ຽນແປງໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຈະເລີນເຕີບໂຕດີຂຶ້ນໃນສະພາບແວດລ້ອມທີ່ເປັນກົດເລັກນ້ອຍ (pH 7.0 – 7.4), ໃນຂະນະທີ່ບາງເສັ້ນຈຸລັງ fibroblast ປົກກະຕິມັກສະພາບແວດລ້ອມທີ່ເປັນດ່າງເລັກນ້ອຍ (pH 7.4 – 7.7).ສາຍເຊລແມງໄມ້ເຊັ່ນ Sf9 ແລະ Sf21 ຈະເລີນເຕີບໂຕດີທີ່ສຸດຢູ່ທີ່ pH 6.2.

2.2.2 ລະດັບ CO2
ຂະຫນາດກາງການຂະຫຍາຍຕົວຄວບຄຸມ pH ຂອງວັດທະນະທໍາແລະ buffers ຈຸລັງໃນວັດທະນະທໍາເພື່ອຕ້ານການປ່ຽນແປງໃນ pH.ໂດຍປົກກະຕິແລ້ວ, buffering ນີ້ແມ່ນບັນລຸໄດ້ໂດຍການບັນຈຸສານອິນຊີ (ຕົວຢ່າງ, HEPES) ຫຼື buffers ທີ່ອີງໃສ່ CO2-bicarbonate.ເນື່ອງຈາກວ່າ pH ຂອງຂະຫນາດກາງແມ່ນຂຶ້ນກັບຄວາມສົມດູນທີ່ລະອຽດອ່ອນຂອງຄາບອນໄດອອກໄຊທີ່ລະລາຍ (CO2) ແລະ bicarbonate (HCO3-), ການປ່ຽນແປງຂອງ CO2 ບັນຍາກາດຈະປ່ຽນ pH ຂອງຂະຫນາດກາງ.ດັ່ງນັ້ນ, ເມື່ອນໍາໃຊ້ buffer ຂະຫນາດກາງທີ່ມີ buffer ທີ່ໃຊ້ CO2-bicarbonate, ມັນຈໍາເປັນຕ້ອງໃຊ້ CO2 exogenous, ໂດຍສະເພາະໃນເວລາທີ່ການປູກຝັງຈຸລັງໃນຖ້ວຍວັດທະນະທໍາເປີດຫຼື culturing ເສັ້ນຈຸລັງທີ່ມີການປ່ຽນແປງທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງ.ເຖິງແມ່ນວ່ານັກຄົ້ນຄວ້າສ່ວນໃຫຍ່ມັກຈະໃຊ້ 5-7% CO2 ໃນອາກາດ, ການທົດລອງວັດທະນະທໍາຈຸລັງສ່ວນໃຫຍ່ມັກຈະໃຊ້ 4-10% CO2.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ແຕ່ລະສື່ມີຄວາມກົດດັນຂອງ CO2 ແລະຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ bicarbonate ທີ່ແນະນໍາເພື່ອບັນລຸ pH ທີ່ຖືກຕ້ອງແລະຄວາມກົດດັນ osmotic;ສໍາລັບຂໍ້ມູນເພີ່ມເຕີມ, ກະລຸນາເບິ່ງຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດຂະຫນາດກາງ.

2.3 ການປູກຝັງພລາສຕິກ
ພາດສະຕິກວັດທະນະທໍາຈຸລັງແມ່ນມີຢູ່ໃນຫຼາຍຮູບແບບ, ຂະຫນາດແລະຫນ້າດິນເພື່ອໃຫ້ເຫມາະສົມກັບການນໍາໃຊ້ວັດທະນະທໍາຈຸລັງຕ່າງໆ.ໃຊ້ຄໍາແນະນໍາດ້ານຫນ້າຂອງພາດສະຕິກວັດທະນະທໍາເຊນແລະຄູ່ມືການລ້ຽງແກະຂອງຈຸລັງຂ້າງລຸ່ມນີ້ເພື່ອຊ່ວຍໃຫ້ທ່ານເລືອກພາດສະຕິກທີ່ເຫມາະສົມສໍາລັບຄໍາຮ້ອງສະຫມັກວັດທະນະທໍາເຊນຂອງທ່ານ.
ເບິ່ງທັງໝົດ Thermo Scientific Nunc cell culture plastics (ລິ້ງໂຄສະນາ)

2.4 ອຸນຫະພູມ
ອຸນຫະພູມທີ່ດີທີ່ສຸດສໍາລັບວັດທະນະທໍາເຊນແມ່ນຂຶ້ນກັບລະດັບຂະຫນາດໃຫຍ່ຂອງອຸນຫະພູມຮ່າງກາຍຂອງເຈົ້າພາບຈາກທີ່ຈຸລັງໄດ້ຖືກແຍກອອກ, ແລະໃນລະດັບຫນ້ອຍກ່ຽວກັບການປ່ຽນແປງທາງກາຍະສາດຂອງອຸນຫະພູມ (ຕົວຢ່າງ, ອຸນຫະພູມຜິວຫນັງອາດຈະຕ່ໍາກວ່າຂອງກ້າມເນື້ອໂຄງກະດູກ. ).ສໍາລັບວັດທະນະທໍາຂອງເຊນ, Overheating ເປັນບັນຫາທີ່ຮ້າຍແຮງກວ່າການ overheating.ດັ່ງນັ້ນ, ອຸນຫະພູມໃນ incubator ປົກກະຕິແລ້ວແມ່ນກໍານົດເລັກນ້ອຍຕ່ໍາກວ່າອຸນຫະພູມທີ່ດີທີ່ສຸດ.

2.4.1 ອຸນຫະພູມທີ່ເໝາະສົມສຳລັບສາຍເຊລຕ່າງໆ
ເສັ້ນຈຸລັງຂອງມະນຸດ ແລະສັດລ້ຽງລູກດ້ວຍນໍ້ານົມສ່ວນໃຫຍ່ຖືກຮັກສາໄວ້ຢູ່ທີ່ 36°C ຫາ 37°C ເພື່ອການເຕີບໂຕທີ່ດີທີ່ສຸດ.
ຈຸລັງແມງໄມ້ຖືກປູກຢູ່ທີ່ 27 ° C ເພື່ອການຂະຫຍາຍຕົວທີ່ດີທີ່ສຸດ;ພວກມັນເຕີບໃຫຍ່ຊ້າກວ່າຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຕ່ໍາແລະອຸນຫະພູມລະຫວ່າງ 27 ° C ຫາ 30 ° C.ສູງກວ່າ 30 ອົງສາ C, ຄວາມແຂງແຮງຂອງຈຸລັງແມງໄມ້ຫຼຸດລົງ, ເຖິງແມ່ນວ່າມັນຈະກັບຄືນສູ່ 27 ° C, ຈຸລັງຈະບໍ່ຟື້ນຕົວ.
ເສັ້ນຈຸລັງສັດປີກຕ້ອງການ 38.5 ອົງສາ C ເພື່ອບັນລຸການເຕີບໂຕສູງສຸດ.ເຖິງແມ່ນວ່າຈຸລັງເຫຼົ່ານີ້ສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ຢູ່ທີ່ 37 ° C, ແຕ່ພວກມັນຈະເຕີບໂຕຊ້າກວ່າ.
ສາຍເຊລທີ່ມາຈາກສັດເລືອດເຢັນ (ເຊັ່ນ: ຝູງສັດນ້ຳເຢັນ, ປານ້ຳເຢັນ) ສາມາດທົນທານຕໍ່ອຸນຫະພູມທີ່ກວ້າງຂອງ 15°C ຫາ 26°C.